Аст 120
АсАТ-ВИТАЛ-01/11 (АСТ В 02.01, В 02.11)
ЦЕНА
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ УНИФИЦИРОВАННЫМ МЕТОДОМ РАЙТМАНА-ФРЕНКЕЛЯ
Кат. № В 02.01 — 400 определений (при объеме пробы 3,05 мл)
Кат. № В 02.11 — 1000 определений (при объеме пробы 3,05 мл)
ПРИНЦИП МЕТОДА
1.L-аспартат + a-кетоглутарат ¬¾АсАТ ¾®
оксалоацетат + L-глутамат
2. фотометрическое определение содержания оксалоацетата в пробе на основе реакции с 2,4-динитрофенилгидразином
ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ)
Свежая сыворотка или плазма крови без следов гемолиза
СОСТАВ НАБОРА
РЕАГЕНТ № 1 — СУБСТРАТНАЯ СМЕСЬ
L-аспарагиновая кислота…………………..………0,1 моль/л
a-кетоглутаровая кислота……………………..2,0 ммоль/л
фосфатный буфер, рН 7,4.……………………..0,1 моль/л
РЕАГЕНТ № 2 — РАСТВОР 2,4-ДНФГ
………….………………………….…………1,0 ммоль/л
РЕАГЕНТ № 3 — КАЛИБРАТОР
раствор пирувата натрия……………………1,0 ммоль/л
РЕАГЕНТ № 4 — НАТРИЙ ЕДКИЙ
NaOH.…………………………………………..4,0 моль/л
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Линейность — отклонение не более 10 %
в диапазоне активностей 0,067-1,25 мкмоль/(с´л)
Чувствительность — не более 0,05 мкмоль/(с´л)
Коэффициент вариации – не более 10 %
Время проведения анализа – 90 мин
ХРАНЕНИЕ
- Срок годности набора – 12 мес ( хранение при 18-25°С).
- Срок хранения вскрытых реагентов №№ 1 и 3 –12 мес ( хранение при 2-4°С).
- Срок хранения вскрытых реагентов №№ 2 и 4 –12 мес ( хранение при 18-25°С).
ВНИМАНИЕ! Тщательно закрывайте флаконы непосредственно после каждого использования реагентов.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА
Содержимое флакона № 4 (или аликвоту) развести бидистиллированной водой, свободной от карбонатов, в 10 раз (например, 1 мл реагента № 4 + 9 мл бидистиллированной воды).
Концентрация полученного рабочего реагента – 0,4 моль/л.
Срок хранения – 3 мес в плотно закрытой полиэтиленовой таре при 18-25°С.
ПРИМЕЧАНИЯ
- При активности АсАТ, превышающий 1,5 ммоль/(ч´л) [0,417 мкмоль/(с´л)], сыворотку крови следует развести. При расчете активности учесть степень разведения.
- 1U/л=16,67 нмоль/(с´л)=
0,0167 мкмоль/с´л=0,06 ммоль/ч´л
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Длина волны: 500-560 нм (lopt=537нм).
Длина оптического пути: 1 см.
Температура инкубации : 37°С/18-25°С
Внести в пробирки:
|
|
Опытная проба |
Холостая проба |
|
Реагент № 1 |
0,25 мл |
0,25 мл |
|
Образец |
0,05 мл |
— |
Пробы перемешать и инкубировать в водяной бане 60 мин при 37 °С.
Добавить в пробирки:
|
|
Опытная проба |
Холостая проба |
|
Реагент № 2 |
0,25 мл |
0,25 мл |
|
Образец |
— |
0,05 мл |
Пробы перемешать и инкубировать 20 мин при 18-25°С.
Далее внести в пробирки по 2,5 мл рабочего реагента, перемешать.
Фотометрировать через 5-10 мин против холостой пробы.
Стабильность окраски – не менее 30 мин.
Расчет активности фермента в сыворотке и плазме крови производят по калибровочному графику.
ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА
|
№ |
1 |
2 |
3 |
4.1 |
4.2 |
|
Проба 1 |
0,05 |
0,55 |
0,50 |
0,139 |
0,5 |
|
Проба 2 |
0,10 |
0,50 |
0,50 |
0,278 |
1,0 |
|
Проба 3 |
0,15 |
0,45 |
0,50 |
0,417 |
1,5 |
|
Проба 4 |
0,20 |
0,40 |
0,50 |
0,556 |
2,0 |
|
Проба 5 |
0,25 |
0,35 |
0,50 |
0,695 |
2,5 |
|
Проба 6 |
0,30 |
0,30 |
0,50 |
0,834 |
3,0 |
|
Холостая
Проба |
— |
0,60 |
0,50 |
— |
— |
- Реагент № 3 (калибратор), мл
- Бидистиллированная вода, мл
- Реагент № 2 (раствор 2,4-ДНФГ), мл
4.1. Концентрация каталитической активнности АсАТ (С)
в калибровочной пробе, мкмоль/(с´л)
4.2. Концентрация каталитической активности АсАТ (С)
в калибровочной пробе, ммоль/(ч´л)
Внести в пробирки компоненты 1-3, перемешать, инкубировать 20 мин при 18-25°С. Добавить во все пробир-ки по 5,0 мл рабочего реагента, перемешать и фотометри-ровать через 5-10 мин против контроля.
РАСЧЕТЫ
- По калибровочному графику рассчитать коэффициент k=C/А,
где: А – адсорбция калибровочной пробы;
С – концентрация каталитической активности АсАТ в этой пробе.
2. Каталитическая концентрация АсАТ (активность) в опытной пробе рассчитывается в мкмоль/(с´л) или ммоль/(ч´л) по формуле: (Аоп – Ахол )´ k,
где: k – коэффициент, рассчитанный по калибровочному графику,
Аоп — адсорбция опытной пробы,
Ахол — адсорбция холостой пробы.
НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ
0,028 – 0,190 мкмоль/(с´л) или 0,1 – 0,68 ммоль/(ч´л) при 37°С
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Правильность проверена при помощи контрольных сывороток “Sigma enzyme control 2N” & “Sigma enzyme control 2E” (Sigma chemical company, USA).
ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА НЕОБХОДИМО ИСПОЛЬЗОВАТЬ ТОЛЬКО ИНСТРУКЦИЮ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА!!!
Источник: labdiagnostics.ru