Анализы пцр что это такое

Анализы пцр что это такое

ПЦР: СВЕРХЧУВСТВИТЕЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ

ПЦР — это метод лабораторной диагностики, направленный на выявление возбудителей инфекционных заболеваний. Трехбуквенный вариант — это аббревиатура названия «полимеразная цепная реакция». Собственно, в этом названии и отражается суть метода

Метод ПЦР был разработан в 1983 году Кэри Мюллисом, за что он был удостоен Нобелевской премии. Изначально метод использовался в основном для научных целей, но затем, разглядев его перспективность и эффективность, метод стали продвигать в практическую медицину.

За генетическую информацию в живом организме любого размера отвечает ДНК — двухспиральная дезоксирибонуклеиновая кислота, состоящая из последовательности четырех нуклеотидов, которые принято обозначать буквами А (аденин), Г (гуанин), Т (тимидин) и Ц (цитозин). Одно из основных правил генетики – правило комплементарности, то есть нуклеотиды соседних спиралей ДНК соединяются только в определеном порядке: А с Т, Г с Ц, и никак иначе. У каждого живого создания (бактерия, вирус, рыба, зверь) – своя ДНК, причем для выявления конкретного организма достаточно иметь лишь небольшой участок этого хранилища генетической информации. Некоторые виды микроорганизмов, например, вирус иммунодефицита человека, хранят генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК, но и ее фрагменты можно находить с помощью ПЦР. Именно на обнаружении этого небольшого, но уникального для каждого отдельного организма участка и построен принцип ПЦР.

Для каждого возбудителя создан свой специфический генетический детектор, эталонный фрагмент ДНК, который по принципу комплементарности точно обнаруживает «свой» фрагмент ДНК и запускает реакцию создания огромного количества его копий. Один цикл ПЦР длится около трех минут, количество копий растет в геометрической прогрессии. Таким образом, за несколько часов количество фрагментов увеличивается в несколько миллиардов раз.

ДОСТОИНСТВА

Понятно, что теперь определить, какой возбудитель у данной конкретной инфекции, достаточно легко.

Какую же практическую выгоду получает человек, когда отправляется на поиски вредоносных микроорганизмов, вооруженный ПЦР?

  • Безусловно, одно из главных достоинств — это универсальность метода. ПЦР позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК, даже когда бессильны другие методы. Оборудование, используемое для ПЦР, стандартно, оно не зависит от того, что именно и где именно мы ищем.
  • Следующий плюс — высокая специфичность. В материале, направленном на исследование, определяется уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для конкретного возбудителя. Таким образом, можно говорить, что специфичность метода достигает 100%. Кроме того, это позволяет одновременно, в одном и том же материале, проводить поиск нескольких возбудителей без какого-либо ущерба для качества ответа.
  • Метод ПЦР обладает высочайшей чувствительностью – мы уже говорили о том, что возможно найти всего один фрагмент генетического материала возбудителя.
  • Несомненное преимущество метода – оперативность. Постановка реакции занимает несколько часов, таким образом, вся диагностика, от момента сдачи материала на анализ до получения результата, отнимет всего один день.
  • При помощи ПЦР определяют возбудителя, а не реакцию на его внедрение со стороны организма. Таким образом, появилась возможность точно диагностировать заболевание еще в инкубационном периоде, когда нет никаких клинических или лабораторных признаков болезни. Когда нужно делать?

Когда следует бежать в лабораторию, чтобы проанализировать итоги вашего летнего отпуска?

Специалисты советуют делать это в следующих случаях: выделения, зуд, чувство жжения в области половых органов, резко изменившийся запах от половых органов, дискомфорт при мочеиспускании, необычный характер выделений (цвет, количество, консистенция), случайный половой контакт без применения презерватива. Безусловно, ПЦР — мощный и эффективный диагностический инструмент, позволяющий быстро и точно найти возбудителей очень многих инфекций. Чаще всего его используют для диагностики именно заболеваний, передающихся половым путем.

В любом случае нельзя ограничиваться только одним методом. Лучше всего комбинировать различные методы исследования – помимо определения самого возбудителя методом ПЦР? необходимо оценивать и иммунный ответ организма, который определяется традиционными серологическими методами, например — ИФА.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)

В основе иммуноферментного анализа (ИФА) лежит иммунная реакция антигена с антителом.

Для исследования методом ИФА используется кровь из вены, полученная натощак.

Иммуно-ферментный анализ (ИФА) применяется в диагностике урогенитальных инфекций для выявления наличия в сыворотке крови специфических иммуноглобулинов (Ig или антител) — белков, вырабатываемых клетками иммунной системы, направленных на борьбу с внедрившимся в организм инфекционным агентом. Связываясь с микробной клеткой или продуктами ее жизнедеятельности, иммуноглобулины нейтрализуют их и способствуют их элиминации. Таким образом, иммуноглобулины представляют собой суть гуморального иммунитета, то есть иммунитета, обусловленного субстанциями, содержащимися в жидкостях тела, в отличие от клеточного иммунитета, связанного с присутствием специальных клеток иммунной системы.

На каждый вид (и даже подвид) возбудителя вырабатываются свои определенные антитела, которые, как правило, не связываются ни с каким другим инфекционным агентом. Благодаря этому определение антител обеспечивает достаточно высокую специфичность анализа. Из пяти классов Ig в диагностике инфекционных заболеваний чаще всего используются Ig трех типов А, M и G. Прежде всего нужно помнить, что существует некоторый промежуток времени с момента внедрения инфекционного агента в организм и до момента появления антител в сыворотке крови — это так называемый серонегативный период. Для различных инфекций и отдельных индивидуумов он может быть неодинаков, в среднем же для возбудителей урогенитальных заболеваний он составляет 1-4 недели.

РАСХОЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИФА И ПЦР

Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать. Обычно это происходит вследствие нескольких причин:

  • «Иммунологический след» — «след» от уже перенесенной инфекции. В ответ на внедрение инфекции организм начинает вырабатывать антитела, в частности, антитела класса IgG. Эти антитела «улавливает» ИФА-анализ. Метод ПЦР реагирует только на наличие молекул ДНК инфекции в организме. В такой ситуации ПЦР-анализ дает отрицательный результат, а ИФА — положительный. При чем в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы положительный результат ИФА-диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления.
  • Разница в оборудовании для проведения диагностики. Получение положительного результата ИФА и ПЦР — отрицательного, может быть вызвано использованием особых тест-систем в ИФА-анализе, которые выявляют все виды бактерий, в том числе те, которые в определенном количеств в норме содержатся в организме человека. Тест-система, используемая в ПЦР-анализе, может быть основана только на определении особого вида болезнетворных бактерий. Например, тест-система для ИФА-диагностики настроена на выявление всех видов хламидий: С. Pneumonia, C. Pecorum, C. Psittaci, а в проведении ПЦР-анализа может быть использована тест-система, выявляющая только С. Trachomatis. Вот почему ИФА-анализ на С. Pneumonia будет положительным, а ПЦР — отрицательным.
  • Разница в используемом материале.

Материал для ПЦР получают из места предполагаемой локализации инфекции. Для ИФА-диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР-диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, хламидии могут локализироваться в разных местах организма. Вызвав хронический сальпингит, проведенный в области шейки матки анализ ПЦР хламидии не обнаружит. Но ИФА-диагностика все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс.

Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР-диагностики. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдать врач-лаборант в том случае, если инфекция «свежая», т. е. даже при наличии определенных симптомов уровень антител класса IgG в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. Для половых инфекций подобный период «молчания» ИФА-диагностики может достигать двух недель.

Новости партнеров:

Вконтакте

Одноклассники

НПЦР и ИФА-диагностика — в чем разница?

Как и анализ ПЦР, ИФА-методы широко применяются в современной лабораторной диагностике ИППП . При чем врач может назначить Вам не только сдать ПЦР анализ, но и провести ИФА — диагностику для выявления определенной инфекции. С непрофессиональной точки зрения пациента подобный комплекс исследования вызывает много вопросов, поскольку все лабораторные методы исследования на первый взгляд кажутся абсолютно одинаковыми. Но, несмотря на внешнюю схожесть, разница между ПЦР, ИФА и другими иммунологическими исследованиями все же есть.

ИФА-анализ основан на выявлении не самой инфекции, а ее продуктов жизнедеятельности — белов-маркеров. ПЦР-анализ напротив выявляет существующие в настоящее время инфекционные агенты (бактерии, вирусы, грибы).

РИФ , как и другие иммунологические методы исследования, тоже несколько уступает достоверности ПЦР-инфекции. Суть РИФ такова, при проведении анализа антигены возбудителя (молекулы белка, свойственные инфекции) ищут антителами к ним. Если антитело «обнаружит» белок, антиген инфекции, значит потенциально человек инфицирован. Однако свойство антитела таково, что они могут реагировать не с одним, а с разными антигенами — так называемые перекрестно-реагирующие антигены. Из-за этого специфичность (способность метода выявлять лишь тот инфекционный агент, для которого данный метод исследования назначен) у РИФ чуть ниже, чем у ПЦР.

Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать. Обычно это происходит вследствие нескольких причин:

  • «Иммунологический след» «след» от уже перенесенной инфекции . В ответ на внедрение инфекции организм начинает вырабатывать антитела, в частности,антитела класса IgG . Эти антитела «улавливает» ИФА-анализ. Метод ПЦР реагирует только на наличие молекул ДНК инфекции в организме. В такой ситуации ПЦР-анализ дает отрицательный результат, а ИФА — положительный. При чем в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы положительный результат ИФА-диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления.
  • Разница в оборудовании для проведения диагностики . Получение положительного результата ИФА и ПЦР — отрицательного, может быть вызвано использованием особых тест-систем в ИФА-анализе, которые выявляют все виды бактерий, в том числе те, которые в определенном количеств в норме содержатся в организме человека. Тест-система , используемая в ПЦР-анализе, может быть основана только на определение особого вида болезнетворных бактерий. Например, тест-система для ИФА-диагностики настроена на выявление всех видов хламидий: С. Pneumonia, C. Pecorum, C. Psitaci. А в проведении ПЦР-анализа может быть использована тест-система, выявляющая только С. Trachomatis . Вот почему, ИФА-анализ на С. Pneumonia будет положительным, а ПЦР — отрицательным.
  • Разница в используемом материале . Материал для ПЦР получают из места предполагаемой локализации инфекции. Для ИФА-диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР-диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, хламидии могут локализироваться в разных местах организма. Вызвав хронический сальпингит, проведенный в области шейки матки анализ ПЦР хламидии не обнаружит. Но ИФА-диагностика все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс.
  • Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР-диагностики. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдать врач-лаборант в том случае, если инфекция «свежая», т. е. даже при наличии определенных симптомов уровень антител класса IgG в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. Для половых инфекций подобный период «молчания» ИФА-диагностики может достигать двух недель.

Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР-анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА-диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.

В лабораторной диагностике существует множество методов выявления необходимого элемента в биоматериале. Для диагностики инфекционных заболеваний чаще всего используют два принципиально разных метода: ИФА и ПЦР . Мы предлагаем Вам ознакомиться с данными методами, чтоб понять плюсы и минусы каждого из них.

ПЦР – один из самых наукоемких методов. Он обнаруживает ДНК микроорганизма. Генетический материал индивидуален для любого микроба, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью и не может «обознаться». Принцип ПЦР заключается в том, что в пробирке происходит многократное удвоение искомого генетического кода. В случае присутствия даже незначительного количества этого кода, произойдет увеличение его количества, и анализатор сможет «уловить» его наличие. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Однако, у этого метода есть и свои минусы. Во-первых, в отличие от ИФА, ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено мазком (например, с уретры или из носа). Во-вторых, за счет своей высокой чувствительности, ПЦР может обнаружить даже мертвые частицы микробов, что наблюдается сразу после лечения. В таком случае, результат будет ложноположительный.

Резюмируя вышесказанное, приведем таблицу сравнения этих двух методов друг с другом:

Характеристика метода

Биоматериал Мазок / кровь Кровь

Цена

Чувствительность

Специфичность

Срок выполнения

«Человеческий фактор»

Отсутствует

Отсутствует

Подготовка к сдаче анализа

Требуется

Не требуется

Локализация возбудителя в организме

Только в месте взятия биоматериала

Роли не играет

Возможность определения стадии инфекционного процесса

Отмена антибиотикотерапии при выполнении анализа

Выявление возбудителя на ранней стадии

Внимание! Данные «классические» методы диагностики в КДЛ «ОЛИМП» модифицированы: ПЦР выполняется в Real-time режиме, вместо ИФА используют ЭХЛ, что повышает качество исследований и сводит к минимуму вероятность ложных результатов.

Для проведения лабораторной диагностики требуется материал. Его характер зависит от типа инфекции, стадии заболевания. Обычно для установления диагноза используется венозная кровь, но возбудитель может обитать во всех секретах организма (моча, спинномозговая жидкость, мокрота). Также исследованию могут подвергаться органы и ткани (биоптаты из язв, соскобы из уретры).

С бактериями приходится сложнее. Для их диагностики приходится ожидать, пока культура подрастет на питательной среде. А после этого провести исследование полученной колонии. Такая методика требует времени (7-10 дней), а полученный результат часто не имеет значения из-за прогрессирования болезни. Однако, при вялотекущих инфекциях этот способ позволяет определить чувствительность микроба к антибактериальному препарату.

Сложнее всего выращивать вирусы. Вирусологический метод применяют крайне редко, т.к. большинство вирусных инфекций развиваются слишком интенсивно.

Серология

Серодиагностика приобретает огромное значение в определении и лечении заболеваний. Этот метод позволяет определить изменение титра антител в крови пациента на протяжении всей болезни. Серологическая реакция идет между антителами сыворотки крови пациента и известным антигеном. Серодиагностика может использоваться для определения всех типов возбудителей (и бактерий, и протистов, и вирусов).

На болезнетворный агент (антиген) в организме человека вырабатывается особое защитное соединение (антитело). Выработка антител – это своеобразная защитная реакция организма, которая впоследствии позволит ему эффективнее защищаться от чужеродных белков (антигенов).

Чаще всего серодиагностика проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА). Что это за тест? Это обычная реакция на выявление связи антиген-антитело. Но для выявления этого комплекса используют фермент, сигнализирующий о наличии соединения. ИФА используется не только для диагностики инфекционных заболеваний. С помощью этой методики можно определять онкомаркеры, гормоны и аллергены.

ИФА позволяет определять три типа антител: иммуноглобулин А, М, G. По наличию определенного типа иммуноглобулинов можно судить о стадии заболевания. Например, если ИФА выявил только IgA, это говорит о начальной стадии заболевания. На 2-4 неделе болезни появляются Igтипа М. И только через месяц появляются все типы, учитывая IgG. После выздоровления в организме остается метка об инфекции. Это IgG(иногда и IgA), при этом титр их сильно снижается. На основе этих данных выставляется диагноз, отслеживается динамика болезни и ответ организма на проводимое лечение.

Применение иммуноферментного анализа

  • ИФА позволяет выявить болезнь на ранней стадии. Например, при диагностике Лайм-боррелиоза антитела образуются через месяц после инфицирования, а клиническая картина может развиться спустя месяцы и годы.
  • ИФА дает высокую точность. Выявить комплекс «антиген-антитело» удается в 90% случаев.
  • ИФА остается довольно простым и дешевым методом исследования. Примерная цена услуги зависит от вида анализа и варьируется в пределах 300-700 рублей. Немного дороже обойдется количественный анализ – 600-1300 рублей.
  • ИФА за счет своей простоты и дешевизны часто используется как метод скрининга. С его помощью удается вычислить переносчиков заболеваний среди обширной популяции.
  • ИФА проводится довольно быстро, ответ не заставит себя ждать.

Внимание! Расшифровка метода проводится врачом. Только специалист может оценить результаты обследования и сопоставить их с клинической картиной.

Однако, при всех достоинствах методика иммуноферментного анализа несовершенна и часто используется в сочетании с другими способами диагностики. Результаты анализа могут быть ложноположительными (часто наблюдается при наличии ревматологических и аутоиммунных болезней) и ложноотрицательными (при сильном иммунодефиците). Тогда диагностика инфекционных заболеваний переходит на молекулярный уровень. Про него расскажем ниже.

Полимеразная цепная реакция

ПЦР диагностика инфекций была создана в конце 20 века. Этот метод позволяет находить генетический материал возбудителя болезни даже в капле крови. Также можно исследовать мочу, мокроту, смывы из носоглотки и любые другие биологические объекты.

Какие возбудители чаще всего нуждаются в ПЦР-диагностике? В клинике полимеразную цепную реакцию используют для подтверждения диагноза СПИД, инфекционный гепатит, папилломавирус, хламидиоз, токсоплазмоз, микоплазмоз, уреаплазмоз. Но при желании с помощью ПЦР можно определить наличие любой инфекции.

Метод ПЦР бывает не только качественным, но и количественным (позволяет определить массивность инфекционных частиц). Это свойство широко используется при лечении вирусных гепатитов.

Расшифровка качественного анализа не требует медицинского образования. Если ДНК (РНК) возбудителя обнаружена в крови (соскобе, моче и т.д.), то диагноз подтверждается. Количественный анализ трактуется только врачом. В целом метод быстр, прост и удобен. Цена на такой вид анализа остается приемлемой. Например, диагностика инфекционных гепатитов варьируется от 400-800 рублей, половые инфекции можно определить за 300-500 рублей.

Перед проведением любого анализа проконсультируйтесь с врачом. Только доктор подскажет вам быстрый путь определения инфекции. Удачи!

Человек часто подвергается влиянию патогенных факторов инфекционного характера. ПЦР положительный анализ означает инфицирование организма определенным микроорганизмом. Но как быть, если несколько анализов противоречат друг другу, например: ПЦР отрицательно, а ИФА положительно? Давайте разберемся в этих тонкостях.

ПЦР анализ крови на инфекции положительный

В современной лечебной практике для диагностирования используют метод полимеразной цепной реакции или ПЦР. Метод ПЦР позволяет добиться дублирования фрагментов ДНК и РНК в исходном материале. Это значит, что положительный анализ ПЦР приходит даже при малых концентрациях возбудителя в крови. Поэтому он имеет высокую точность диагностирования заболевания и может применяться на ранних стадиях.

Что означает ПЦР положительный анализ?

Если при проведении метода полимеразной цепной реакции выявляется ДНК искомого организма, такой анализ ЦПР является положительным. Данный результат показывает, что в организме в текущее время присутствует возбудитель. Но не стоит забывать и остальных методах, которые являются не менее полезными

Чем отличается ПЦР, ИФА анализ и анализ на антитела?

Хоть эти методы и направлены на одни и те же цели, механизм действия у них отличается: ПЦР показывает наличие элементов ДНК или РНК возбудителя в биологическом материале. Для ПЦР чаще используется материал из предполагаемого очага инфекции.

ИФА или анализ на антитела позволяет идентифицировать реакцию антиген-антитело. Иммуноферментный анализ используется для уточнения стадии заболевания. ИФА анализ крови на антитела показывает наличие иммуноглобулинов в крови. Наличие антител определяется вне зависимости от места локализации очага инфекции

Анализ крови на антитела поможет обнаружить в крови наличие:

  • Иммуноглобулинов типа IgA
  • Иммуноглобулинов типа IgG
  • Иммуноглобулинов типа IgM

Обнаружение в крови Иммуноглобулинов типа говорит об активном инфекционном процессе IgM. Если заболевание протекает в активной стадии, пациенту требуется пройти лечение. Если ПЦР отрицательный, а анализ на антитела положительный, что это значит? Бывают ситуации, когда по результатам анализа у пациента ПЦР отрицательно, а ИФА положительно.

Подобное может произойти вследствие нескольких факторов:

  • Остаточный или иммунологический след, который остается в результате выработки иммуноглобулина.
  • Разные места забора материала при проведении ИФА и ПЦР.
  • Пациент перенес данное заболевание в прошлом, возможно бессимптомно и не является больным на момент обследования.

В подобном случае необходима детализация анализов крови и консультация врача, ведь нужно разобраться, что именно дает положительную реакцию.

Что делать, если пришел положительный ПЦР анализ?

К сожалению, симптомы некоторых заболеваний не всегда видны, и в организме человека таятся скрытые инфекции. После получения положительного результата ПЦР, не стоит сразу паниковать и волноваться. Существует вероятность ложно-позитивной реакции ПЦР. В подобной ситуации необходимо повторно выполнить данный анализ.

Если при первом диагностировании сдавался ПЦР качественный, то при повторном рекомендуется проходить ПЦР количественный.

Выполняйте ПЦР анализы в лаборатории при профильной клинике. Если анализ транспортируется в сетевую лабораторию, велика вероятность накладок. Если диагноз подтвердится, необходимо обратится к профильному специалисту для проведения комплексного лечения.

При необходимости сдать любые анализы на инфекции, обращайтесь в нашу клинику.



Источник: shashlika.ru


Добавить комментарий